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人的二肽酶2(DPEP2)检测试剂盒

作者:
wuhaojingmao
发表于:
2013-11-18, 22:35
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075386Hu,ELISA Kit for Dipeptidase 2 (DPEP2)

ELISA 规格:48T/96T
检测范围:详见说明书
灵敏度:详见说明书
产品应用:ELISA(仅供体外研究使用,不用于临床诊断!)
质量认证:SGS,ISO 9001:2008;ISO 13485:2003

 

[操作步骤]

1、 加样:分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔7孔,依次加入100μL不同浓度的标准品(见试剂准备2)。空白孔加100μL(见试剂准备第二步最后一管),余孔加待测样品100μL,酶标板加上覆膜,37oC温育2小时。

2、 弃去液体,甩干,不用洗涤。

3、 每孔加检测溶液A工作液100μL(临用前配制),酶标板加上覆膜,37oC温育1小时。

4、 弃去孔内液体,每孔用350μL的洗涤液洗涤,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次(也可轻拍将孔内液体拍干),重复洗板3次。最后一次洗涤后,要把孔内的洗涤液完全甩干。自动洗板机亦可。

5、 每孔加检测溶液B工作液(临用前配制)100μL,加上覆膜,37oC温育30分钟。

6、 弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤4。

7、 每孔加底物溶液90μL,酶标板加上覆膜,37oC避光显色(反应时间控制在15-25分钟,不要超过30分钟。当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显时,即可终止)。

8、 每孔加终止溶液50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。如出现颜色不匀一,请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。

9、 在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后,立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(O.D.值)。

注意

1、 试剂准备:准备一次实验所需要的酶标条,其它的可从微孔板上拆下,密封,按照说明书要求保存,以备下次使用。

2、 加样:实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。加样时注意不要有气泡,将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。加样或加试剂时,第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预温育”时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。因此,一次加样时间(包括标准品及所有样品)最好控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。

3、 温育:为防止样品蒸发,实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以避免液体蒸发,洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态,同时应严格遵守给定的温育时间和温度。

4、 洗涤:充分的洗涤非常重要,在每次洗涤过程中,都要将洗涤液完全甩干。洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数。如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实 验过程中。

5、 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟观察一次),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

6、 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。

7、 如果实验室内湿度低于60%,推荐使用加湿器提高湿度水平。

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elisa kit

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