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杜仲的蛋白纯化及其药理研究

作者:
medicilon_美迪西
发表于:
2018-10-09, 13:43
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杜仲是国内特有的药用物种,经常作为临床使用,一般都是使用皮入药。对杜仲皮和杜仲胶颗粒中的蛋白进行了分离和蛋白纯化,为杜仲中的生物活性成分和药理研究提供了手段。但是杜仲中的很多化合物的结构和性质特别相近,因此其有效成分的提取和分离存在一定困难。

蛋白表达纯化是一项广泛应用于生物技术、生命科学和医药等研究领域的技术,用于重组蛋白表达的宿主细胞通常来源于原核细胞、哺乳细胞、昆虫细胞和酵母细胞等蛋白表达系统。美迪西提供蛋白表达服务,拥有多种蛋白表达系统,包括原核蛋白表达系统、酵母蛋白表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统(杆状病毒)哺乳动物细胞蛋白表达系统,具备多种融合技术,可以为客户在蛋白表达与纯化方面提供多种选择。从方案设计、基因优化、表达条件优化到纯化的技术体系,以提高客户的目的蛋白表达水平。

1、杜仲的蛋白分离研究

用凝胶层析、反相高效色谱层析等分离纯化方法,从杜仲树皮中分离到分子量为4.16的一个新杜仲抗真菌蛋白,并进行了蛋白纯化

(1)用SDS-PAGE方法从杜仲胶颗粒中分离到分子量约为14、16、18、22、24、28、30、32和55 kDa的9个杜仲胶颗粒结合蛋白。用液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)技术,鉴定了4.16、4.2、8.3、16和18 kDa蛋白序列,获得14个肽片段。在抗菌肽数据库(APD)中对这14个肽片段进行结构分析、抗菌活性预测和序列比对,结果显示有11个肽片段具有抗菌肽典型结构。

(2)纸片法对EAFP3进行体外抗菌活性检测,抑菌活性检测结果表明:EAFP3可抑制酵母、酵母类真菌、霉菌和植物病原真菌的生长,EAFP3对白色念珠球菌、黄曲霉、番茄灰霉病菌的IC_(50)值分别为31.25、31.25和62.5μg/mL。EAFP3对高温有一定耐受性,在100℃加热30 min仍有显著抑制活性;可适应较宽pH范围,在pH从5.8-8.0范围内都有显著抑制活性。该研究结果可能为创制新型生物农药和生物药物提供了先导化合物信息,为克隆编码杜仲抗菌蛋白的基因提供了引物和探针设计序列。

2、杜仲的药理研究

(1)抗肿瘤作用

现代药理实验证明杜仲有抗癌和抑癌之功效,其有效成分与其杜仲所含的木脂素、苯丙素及环烯醚萜类化合物有关。如研究者从杜仲叶氯仿提取物中分离出的地普黄酮,是一种干扰T淋巴细胞功能的免疫抑制物质,对人鼻咽癌(KB)和鼠淋巴细胞白血病(P388)均有生长抑制活性。杜仲具有兴奋垂体-肾上腺皮质系统、增强肾上腺皮质功能的作用。

(2)降压作用

杜仲的降压作用是经过多年临床证实的,现代药理研究试验有效地揭示了这一作用的机制。实验证明,杜仲水提物对犬有明显的降压作用,而且疗效平稳、无毒、无副作用。

(3)对免疫系统的影响

给小白鼠腹腔注射杜仲叶的20%和50%的乙醇提取物,可明显增强小白鼠脾淋巴细胞转化功能及腹腔巨噬细胞的吞噬功能,而对正常小鼠脾抗体形成细胞无明显影响。热水泡杜仲茶提取物用1%NaOH冻结,干燥后得到的碱性物质为含糖醛酸的酸性多糖类,该碱性物有抗破坏人体免疫系统病毒的功能,有可能用于预防和治疗艾滋病。

(4)抗衰老作用

杜仲能增强机体的非特异性免疫功能,对细胞免疫具有双向调节作用,提示杜仲具有抗衰老作用。现代研究发现,杜仲水提物能抑制乙二胺四乙酸、H2O2、维生素C等对脱氧核糖、DNA造成的氧化损伤。

(5)骨细胞增殖作用

杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR106成骨样细胞体外共同培养,结果显示,水提液具有最强的促进细胞增殖作用,其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对细胞增殖有一定的促进作用,而萃取后的剩余水层仍保留与原水层相似的促进细胞增殖作用,表明杜仲中极性大的部分可能含有直接作用于成骨细胞的活性成分。

(6)其他作用

杜仲水煎剂对结核杆菌、福氏痢疾杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、炭疽杆菌有抑制作用。杜仲叶的各种麻醉犬均有利尿作用,且无快速耐受现象,对正常大鼠和小鼠也有利尿作用。杜仲的利尿作用与桃叶珊瑚甙有关,该成分能刺激副交感神经中枢,加快尿酸转移和排出,利尿作用明显。此外杜仲还有利胆作用、降血脂作用、保胎作用、增强肌肉作用、中枢抑制作用等。

总之,杜仲具有广泛的药理作用,其应用前景广阔,在医药领域具有巨大的潜力。

 

 

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