medicilon_美迪西

medicilon_美迪西

(被访问2次)

药物杂质分析技术之HPLC-MS联用技术

作者:
medicilon_美迪西
发表于:
2018-07-13, 13:31
评论:
0
浏览:
14
RSS:
0

蛋白质组学是指研究细胞、组织或生物体蛋白质组的组成及其变化规律的科学,目前蛋白质组学研究正日益成为现代生物学中的研究热点。蛋白质组学技术服务结合基因组学、代谢学等生命组学研究技术,来挖掘多层次分子信息,同时应用现代遗传技术、分子影像技术、生物信息技术,结合患者生活环境和临床数据,可以实现精准的疾病分类和诊断,制定出具有个性化的疾病预防和诊疗方案。因此蛋白质组学不仅在早期诊断方面,还在在疾病预防、分型、疗效监测、判断预后等诸多方面都有着巨大的潜力。

蛋白质组样品的制备是蛋白质组学研究的基本技术之一,也是蛋白质组学研究的首要步骤,该技术要求尽可能完整地将所有的蛋白质从细胞或者组织中提取出来。蛋白质学样品制备的基本原则是:

1、蛋白质学样品制备的基本原则

1)样品处理尽量简单,减少蛋白损失;

2)尽量避免蛋白的降解;

3)尽可能提高样品蛋白的溶解度;

4)防止溶液介质中对蛋白质的人为修饰;

5)去除非蛋白杂质。

2、制备过程

蛋白质的制备一般要经过4个阶段:选择材料和预处理,材料的破碎,提取和纯化,浓缩、干燥和保存。由于蛋白种类繁多,性质差异较大,因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。根据性质进行分类,大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质。

 

3、制备原理

蛋白质在不同溶剂中溶解度的差异,主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例,其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。

1)温度

多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间。但另一方面,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作。

2pH

蛋白质、酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。

3)离子强度

稀浓度可促进蛋白质的溶解,称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合,具有保护蛋白质不易变性的优点,因此在提取液中加入少量 NaCl等中性盐,一般以0.15摩尔为宜,缓冲液常会采用 0.02-0.05M 磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用,将细胞内蛋白质提取出来,并与其它不需要的物质分开。

4、制备方法

破碎的方法有许多种,可归纳为:

1)机械法(超声波法、机械匀浆法、液氮研磨法和玻璃珠破碎法);

2)化学法(去污剂法、酶裂解法);

3)物理法(循环冻融法、渗透法、高压法)。

这些方法有不同的应用范围,基本的原则都是要以最小的限度减少蛋白水解和其它形式的蛋白降解变性,这也就是在样品制备破碎这一步的关键所在。而常用的方法有:超声波法、机械匀浆法、液氮研磨法、盐析、沉淀法。其中,有机溶剂沉淀法使用较为普遍,常用的有机溶剂有丙酮、苯酚等。

有机溶剂沉淀法的优缺点

    优点:

1)分辨能力高,即一种蛋白质或其他溶质只有在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉淀;

2)根据实验要求选择最合适的溶剂可以使实验尽可能准确;

3)成本较低。

缺点:容易引起蛋白质变性失活,操作常需在低温下进行。且有机溶剂易燃、易爆、安全要求较高。

 

冷丙酮沉淀和苯酚提取方法的优缺点

 

提取方法

优点

缺点

冷丙酮提取

操作简单,适合一般蛋白的提取

容易使蛋白变性,杂质较多的蛋白提取效果较差

苯酚的提取

适合杂质较多的蛋白样本,需求样本量少

操作过程较繁琐,耗时长

 

丙酮和苯酚沉淀法注意事项:

冷丙酮沉淀

(1)冷丙酮沉淀的时间与温度;

常温或升温时,蛋白立体结构展开,丙酮极容易与其中的色氨酸、酪氨酸等氨基酸进行疏水结合导致蛋白变性,所以我们通常预冷丙酮并且低温操作;

(2)超声功率和时间,重在观察超声后样品溶性的均匀度;

(3)一般和三氯乙酸一起使用,效果更好;

(4)还原烷基化。

苯酚提取

(1)各种试剂的正确及精确配制(如:煎糖提取液);

(2)加入饱和酚后要充分震荡和离心(使蛋白充分与酚、色素H键结合,让其分三层);

(3)需纯化蛋白(甲醇、TCA/冷丙酮去色素、苯酚等杂质)。

美迪西的蛋白质组学技术服务整合了生物化学、细胞生物学、分子生物学与质谱等多项技术,能够实现蛋白鉴定、差异蛋白定量分析、复合物分离、蛋白翻译后修饰(如:磷酸化、糖基化、泛素化等)的解析及蛋白质组信息学分析。

 

脚印

评论 (0)

注册用户登录才能发表评论,登录注册

日历

<< 2018年9月 >>
      1
2345678
9101112131415
16171819202122
23242526272829
30      

分类

标签

生物合成药物 (1) 生物制品 (1) 哺乳动物载体表达 (1) 疫苗 (2) 人胰岛素 (1) 人生长激素 (1) 药物代谢动力学 (4) 呋喃唑酮片 (1) 幽门螺旋杆菌 (1) 亲和层析法 (1) 生物特异亲和层析 (1) 人工配体亲和层析 (1) 金属螯合亲和层析 (1) CMC申报 (2) 质量控制 (1) 多肽药物改良 (1) 多肽脂质体 (1) 多肽微球 (1) 乙型肝炎病毒 (1) HBX (1) 辅料 (1) 药用辅料 (1) 药物稳定性试验 (3) 维生素C钙 (1) T细胞因子4 (1) 肾癌 (1) TCF21 (1) 肺癌细胞 (1) 转录因子21 (1) 抑癌基因 (1) 融合标签技术 (1) 基因重组技术 (1) 葡萄球菌蛋白A (1) 绿色荧光蛋白 (2) 药物临床试验 (1) 药品接收 (1) 药品保管 (1) 易感基因 (1) 候选基因 (1) 放射性同位素服务 (1) 同位素标记 (1) 新药毒理学研究 (1) 离子通道筛选 (1) 钾离子通道 (1) 荧光蛋白技术 (1) GFP (1) 中药研发 (1) 活性分子探针 (1) 组学分析技术手段 (1) 药理学研究 (2) 苦参碱 (1) 化合物筛选 (3) CDK1 (1) 恶性肿瘤 (2) 靶点蛋白 (1) 重组蛋白服务 (1) 重组CHO乙肝疫苗 (1) 重组酵母乙肝疫苗 (1) 枸杞多糖 (1) 降血糖 (2) 酵母双杂交实验服 (1) LKB1 (1) 肿瘤抑制蛋白 (1) T细胞 (1) 化合物酶活测试 (2) 瘦柄红石蕊 (1) 菲醌化合物 (1) biruloquinone (1) 高通量生物分析技 (1) 微流控芯片 (1) 核酸分析 (1) 黄连素 (1) 消炎 (1) 生物碱 (1) 新药筛选 (1) 高通量筛选技术 (1) 细胞模型 (2) 治疗性抗体 (1) 癌症疫苗 (1) 小分子抑制剂 (1) SCID-hu小鼠 (2) 乙型肝炎病毒感染 (1) 结肠癌 (1) 前药 (1) 药物制剂开发中 (1) 口服制剂 (1) 新药研发服务 (2) PK-PD (1) 模型 (1) 对氟苄胺 (1) 药物中间体 (1) 大鼠脑组织 (1) 神经科学 (1) 脑组织石蜡切片 (1) PD模型 (1) 对照品 (1) 线粒体 (2) 衰老 (1) 金钗石斛 (1) 基因芯片 (2) DNA微阵列 (1) 生物芯片 (1) CRO公司 (3) 药效学 (1) 抗CD20单克隆抗体 (1) 小鼠肿瘤 (1) 移植造模 (1) 抗癌药 (1) 人P450酶 (1) 受体酪氨酸激酶 (1) 小分子激酶抑制剂 (1) c-Met (1) 阿司匹林缓释片 (1) 大麻二酚 (1) 吉西他滨 (1) 胰腺癌 (2) CBD (1) 仿制药研发 (2) QbD (1) 产品质量概况 (1) 关键质量属性 (1) 产业聚集效应 (1) 抗体检测 (1) Med19基因 (1) 人乳腺癌 (1) 高效液相色谱法 (1) HPLC (1) 肿瘤靶点 (1) 临方制剂 (1) 药物剂型 (1) 神经生长因子 (1) NGF (1) 毕赤酵母 (2) 杆状病毒 (1) 基因治疗 (1) 溶出度 (2) 溶出度试验 (1) 肿瘤表面糖蛋白 (1) 制剂工艺外包 (1) 芪参健骨颗粒 (1) 制备工艺 (1) 急性毒性研究 (1) 香豆素类化合物 (1) 鼻咽癌 (1) 细胞实验污染 (1) 细胞生物学 (1) 硒蛋白P (1) RPL30 (1) SBP2 (1) Efsec (1) 筛选药物 (1) 药物靶标 (1) 普通药物制剂 (1) 精准给药制剂 (1) 黄芩苷锌 (1) CAR-T细胞疗法 (1) 实体瘤 (1) 大青叶 (1) 菘蓝 (1) 吉非替尼 (1) 肠道微生物 (1) 格列美脲片 (1) 原研药 (1) miRNA (1) 抗肿瘤机制 (2) 纯化酶测试 (1) 化合物活性 (1) 上海生物公司 (3) 药品临床试验管理 (1) 细胞因子 (1) 水稻胚乳 (1) 生物技术药物 (2) 新药研究申请 (1) 植物药 (1) 药理毒理 (3) 沉淀分离法 (1) 蛋白质沉淀 (1) 多组分药品 (1) 分析物 (1) 抗体药物 (1) 热门靶点 (1) 白细胞介素8 (1) IL-8 (1) 生物活性监测 (1) 光谱成像技术 (1) 植物瞬时表达系统 (1) 水痘疫苗 (1) 接种效果 (1) 糖尿病动物模型 (1) 细胞转染 (1) 细胞转染技术服务 (1) 选择动物 (1) 新药研究 (1) 制剂稳定性 (1) 新型化合物 (1) 阿霉素 (1) 二氯乙酸盐 (1) 药物合成工艺 (1) 阿司匹林 (1) 槐甙 (1) 大鼠骨细胞 (1) β-榄香烯 (1) 多药耐药性 (1) 溶酶体 (1) 癌细胞 (1) 细胞自噬 (1) 质粒载体 (1) 酵母系统 (1) 糖蛋白激素受体 (1) Lgr5 (1) 酶活检测服务 (1) FISH (1) 染色体 (1) 结构畸变 (1) 先导化合物 (1) 三阴性乳腺癌 (1) 金属化合物 (1) 方剂 (1) 多靶点药物 (1) 靶向治疗 (1) 动物 (1) 艾滋病动物模型 (1) 人源化小鼠 (1) 三七皂苷R1 (1) 药物代谢 (1) 免疫组化 (1) 熊去氧胆酸 (1) DNA编码化合物库 (1) 新药发现 (1) DDI (1) 药物相互作用 (1) 固体制剂 (1) 剂型 (1) 阵列筛选技术 (1) 载体构建 (1) 基因克隆 (1) 双酶切 (1) 紫衫醇注射液 (1) 泰素 (1) 中草药 (1) 组合化学 (1) 有机化合物 (1) 免疫动物模型 (1) 小鼠结直肠癌 (1) 刺五加 (1) 刺五加注射液 (1) NDA申报 (1) ANDA申报 (1) 仿制药申请 (1) 药物不良反应 (1) 附加剂 (1) 药理 (1) 临床前动物试验 (1) 米氮平 (1) 抑郁小鼠模型 (1) 重组多肽 (1) 重组DNA药物 (1) 新型疫苗 (1) 黑色素瘤 (1) Diprovocim (1) 天麻素 (1) NSD2 (1) 起始物料 (1) 氨基酸 (1) 树脂 (1) 药物活性测试 (1) 细胞毒性 (1) 生物治疗药物 (1) 抗体类药物 (1) 考核指标 (1) 验证体系 (1) 质量源于设计 (1) GLP认证 (1) 实验动物 (1) 饲养管理 (1) IVIVC (1) 体内体外相关性 (1) 芦荟 (1) 抗衰老 (1) 药品研发 (2) 原料药成本 (2) 中药注射液 (0) 不良反应 (0) 海洋多肽药物 (1) 创新药研发 (1) 1期临床 (1) 药学研究 (1) 基因疗法 (1) α-突触核蛋白 (1) 小鼠造血干细胞因 (1) SCF (1) 酿酒酵母 (1) 重组蛋白 (2) 重组蛋白表达 (4) 癌症 (1) 肿瘤 (6) 美迪西 (1) Biacore检测 (0) SPR (0) 生物医学 (1) 生物制药 (0) BIacore技术 (0) 咖啡致癌 (1) 毒代动力学 (1) ADME (2) 药物吸收 (1) 药物分布 (1) 免疫组化染色服务 (3) 肿瘤免疫疗法 (0) 溶瘤病毒 (0) 检查点抑制剂 (0) 肿瘤治疗 (2) 帕金森动物模型 (5) 丙烯醛 (1) 肼苯哒嗪 (1) 沙丁胺醇 (1) 帕金森疾病 (2) 化学多肽合成 (4) 多肽药物 (3) 化学药物 (3) 生物合成 (2) 固相合成 (2) 小分子药物 (1) 药代动力学 (8) HH185 (1) 抗肿瘤新药 (1) FGFR抑制剂 (1) 布洛芬 (2) 紫外光谱法 (1) 红外光谱法 (1) 杂质分析 (3) 化药筛选 (1) 小分子高通量筛选 (1) 异柠檬酸脱氢酶突 (1) 抗肿瘤药物 (5) 新药研发 (5) 布洛芬药物 (0) 固体制剂研发 (4) 溶出度测定 (1) 口服固体制剂 (2) 生物相关性介质 (1) 化学合成药物 (5) 长春质碱 (1) 长春花 (1) 文多灵 (1) 大肠杆菌表达 (7) 原核表达系统 (2) P450 (2) 紫杉醇 (2) 化学合成 (2) AOMDSS法 (1) 小鼠结肠癌模型 (4) 动物模型 (9) DMH法 (1) AOM法 (1) 生物利用度 (1) 细辛脑 (1) 生物利用度测定 (1) 石菖蒲 (1) 药动学 (1) 脑水肿 (1) 药理学 (5) 甘露醇 (1) 高颅内压 (1) 药理作用 (2) 长期毒性试验 (3) 毒理学研究 (7) 银翘柴桂颗粒 (1) 动物实验 (1) 流感 (1) 毒性测试 (1) 生物药物研发 (4) 干细胞 (3) 动物试验 (1) 一致性评价 (6) 伊瑞可 (1) 肺癌 (4) 药物制剂分析 (3) HBV感染 (2) NA治疗 (1) 干扰素 (1) 核苷核苷酸类似物 (1) 生物分析技术 (2) 人体芯片 (1) 器官芯片 (1) 酶活性检测服务 (3) 蛋白酪氨酸激酶 (2) 三磷酸腺苷 (1) 酪氨酸蛋白激酶抑 (1) 重组蛋白表达与纯 (1) 大肠杆菌表达系统 (2) 可溶性表达 (1) 密码子 (1) 膜蛋白 (1) 小鼠肾癌模型 (1) 肿瘤模型 (2) 小鼠模型 (3) 计算生物学 (3) 癌症治疗 (1) 数学 (1) 疾病模型 (1) 酵母双杂交服务 (5) 蛋白质组学 (3) 肠道菌群 (2) 代谢性疾病 (1) 糖尿病 (2) 小鼠药代模型 (1) 人参皂苷 (1) Rg3 (1) 定制合成服务 (1) 阿奇霉素 (1) 普利制药 (1) 注射用阿奇霉素 (1) 创新药制剂 (3) 药物靶点 (3) 化学药品研发 (4) 肉豆蔻 (1) 木脂素 (1) 化学成分 (1) 药理活性 (1) 药物筛选 (4) 药物研发流程 (5) 美迪西生物医药 (1) 高通量筛选 (1) 中药制剂学技术 (1) 药物临床前评价 (2) 柴胡注射液 (1) 说明书 (2) 儿童禁用 (1) 毒理实验服务机构 (2) CAR-T疗法 (1) 生物试验服务 (1) 风湿病 (1) 生物制剂 (2) 临床试验药品管理 (3) GPCR蛋白 (1) 蛋白表达纯化 (3) GPCR (1) 疾病 (2) 生物等效性试验费 (1) 阿卡波糖 (1) 降糖药物 (2) 重组蛋白药物 (1) 哺乳动物表达载体 (2) CHO细胞系 (2) 蛋白质组学服务 (2) 人工智能 (1) AI (1) 增敏 (1) 小鼠肿瘤模型 (6) PARP抑制剂 (1) Olaparib (1) 新药研发外包 (1) 医药研发外包 (10) CRO (4) 药物研发 (5) 药物筛选模型 (6) shp2抑制剂 (1) 抑制肿瘤 (1) 耐药性 (1) 高通量筛选模型 (1) 酵母双杂交文库构 (1) 分子生物学 (1) BP重组 (1) LR重组 (1) 膜体系 (1) 生物药物分析 (4) 样品前处理 (1) 离线方法 (1) 超滤技术 (1) SPME (1) 新药临床前研究 (3) 动物选择 (1) 毒理学 (2) 一站式综合服务 (3) 稳定细胞株筛选 (1) 处方筛选 (4) 注射剂 (2) 仿制药 (5) 工艺研究 (1) 处方前 (0) 工艺技术 (1) 工艺验证 (1) 瘤块接种 (1) 裸鼠肿瘤模型 (4) 裸鼠成瘤 (2) 细胞接种 (1) 幼龄动物试验 (1) 临床前ADME (1) 幼龄动物 (1) 毒药物动力学 (1) be试验费用 (2) 生物等效性 (1) BE豁免 (1) 生物等效性豁免 (1) BCS (2) 临床前glp实验 (1) 安全性评价 (2) GLP实验室 (1) 中药复方制剂 (1) 裸鼠成瘤实验 (3) 药物制剂研发 (2) 气雾剂 (1) 吸入给药制剂 (1) 肿瘤细胞 (2) 细胞实验服务 (2) 免疫细胞 (1) 重组蛋白纯化 (3) FISH技术 (1) 原位杂交公司 (4) PCR技术 (1) 新一代测序技术 (1) 原核表达服务 (2) 原核蛋白质 (1) pET (1) MTT比色法 (1) 生物活性检测 (2) 重组蛋白表达服务 (3) 转基因植物 (1) 乙醇 (1) 重组蛋白表达优化 (1) 药品外包工艺 (1) 合同加工外包 (1) CMO (2) CDMO (2) 单克隆抗体 (5) 治疗用单抗 (1) 单抗药物 (1) 巴氏系统 (1) 酵母表达 (3) 毕赤酵母细胞表达 (1) 酵母表达系统 (5) 甲醇 (1) 肿瘤模型公司 (5) 肝细胞癌 (1) 诱发性肿瘤动物模 (1) 肝癌模型 (1) SCID小鼠 (4) NOD-SCID小鼠 (1) Nude小鼠 (1) 免疫缺陷型小鼠 (1) CBAN (1) 小鼠 (3) 临床前CRO公司排名 (1) 昆虫细胞表达系统 (4) CYP2C19 (1) 细胞色素P450 (2) 药物体内试验 (3) 药物体外试验 (1) 蛋白分离公司 (1) 蛋白纯化 (2) 蛋白提取 (1) 帕金森病 (3) 维生素B3 (1) 烟酰胺核糖体 (1) 处方前研究 (1) 处方研究 (1) 参比制剂 (1) SP法 (1) SA (1) 链霉素抗生物素蛋 (1) 药理研究 (7) 丹参 (1) 注射液 (1) 依非韦伦片 (1) HIV (1) 艾滋病 (1) 肠道病毒 (1) 肠道病毒71型 (1) VP1蛋白 (1) 昆虫细胞-杆状病毒 (1) 细胞药效学研究 (3) 骨质疏松 (1) 果糖 (1) 大鼠模型 (1) 果糖-16-二磷酸 (1) 皮下瘤实验服务 (2) 裸鼠 (1) 人肝癌 (1) 临床前动物实验 (3) 临床试验 (1) ind申报 (3) 大麻 (1) 探索性IND研究 (1) 肺癌检测 (1) 代谢产物分析 (3) 血浆 (1) 液体活检 (1) 中间体定制合成 (2) 医药中间体 (1) 原料药 (3) 活性药 (1) 生物电子等排 (2) 先导化合物优化 (3) 天然先导化合物 (2) 药效优化 (1) 药物杂质 (1) 分析方法 (1) 药品贮存 (1) 分子生物学服务 (3) PCR (1) 聚合酶链式反应 (1) 临床前药效 (3) 心脏病 (1) 细胞治疗 (2) 生物技术服务 (1) 血小板 (1) 分离纯化 (2) 流式细胞术 (1) 杆状病毒载体表达 (3) 昆虫杆状病毒表达 (2) 黎芦生物碱 (1) 急性毒性试验 (1) 白血病 (1) 重症联合免疫缺陷 (1) BE试验 (5) 皮肤外用药 (1) 癌症诊断 (1) 端粒酶 (1) 基因敲除 (1) 造模机制 (2) 治疗癌症 (1) 药物制剂开发 (2) 人源化小鼠模型 (2) 酿酒酵母表达系统 (1) 小分子药物筛选 (3) 临床前研究 (3) 鼻腔给药 (1) 给药途径 (2) western印迹分析 (3) p53蛋白 (1) 人鼻咽癌 (1) 肿瘤抑制子 (1) 药物制剂 (5) 中药复方 (2) 大复方 (1) 、哺乳动物细胞表 (1) 原位移植 (1) 裸鼠肿瘤原位移植 (1) 疫苗制备 (2) HPV疫苗 (1) 人血脑屏障 (1) 新药开发 (1) 荧光原位杂交 (2) 产前诊断 (1) 分子杂交 (1) 阿司匹林肠溶片 (1) 化合物定制合成 (1) 杂交瘤技术 (1) 噬菌体展示技术 (1) 儿童用药 (2) 布洛芬分散片 (1) 药物化学 (3) 天然药物 (1) 银杏内酯 (1) 银杏叶 (1) 生物实验服务 (2) 生物标志物 (1) 膀胱癌 (1) p53样膀胱癌 (1) 蛋白分离服务 (2) 生物亲和层析 (1) 血浆蛋白 (1) 肝素亲和层析 (1) 明胶亲和层析 (1) 多肽药物合成 (3) 中国cro公司排名 (3) SWOT分析 (1) 中国GLP机构排名 (2) 药物安全性评价 (1) GLP体系 (1) 癌症动物模型 (1) 乳腺癌 (1) 药物杂质分析 (1) HPLC-MS (3) 液相色谱-质谱 (2) 蛋白质组学技术服 (1)

最新评论