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抗原在ELISA试剂盒中的应用

作者:
getto
发表于:
2014-01-20, 12:35
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  抗原,是指能在体内引起免疫反应的物质;某一物质能否成为抗原,首先是由它本身的某些性质决定的。抗原的纯度不高,特异性不强;合成抗原一般为多肽片段,缺乏天然抗原所具有的立体结构表位,亲和力不高,可能导致相应表位的抗体漏检:基因重组抗原具有安全、特异性强、亲和力高、产量大等特点,是一种比较理想的抗原,但其纯化比较挫折。

  荧光和化学发光测定的敏感度均高于比色测定,标准曲线的线性范围亦较比色反应宽,测定效果优于常用的比色ELISA试剂盒,抗体在ELISA试剂盒中应用的抗体可分为多克隆抗体(多抗)和单克隆抗体(单抗)。在使用双单抗一步法时,应注意抗原过剩时的“钩状效应”。

  而单抗仅针对抗体的单一表位,亲和力和特异性均较多抗高,且制备技术成熟,产量大,批间差异小,但结合位点的单一也正是其弱点之所在,在双抗体夹心法中,如包被和指示抗体使用同一单抗,则由于结合位点的缺乏,等闲造成假阴性结果。多为体外的蛋白、病菌等各类物质,椰油机体本身的,如自身免疫缺陷病症会对自身产生免疫。

  多抗取白免疫动物的抗血清,制备较简单,但抗血清成分复杂,除含针对抗原(多个表位)的抗体外,还含有多种其他抗体,亲和力和特异性相对要低于单抗,且制备周期长,批间差异较大。主要有3类,即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。抗原在ELISA试剂盒中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。

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