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关于培养基中的添加物、PH值、保存的问题

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 ——细胞培养用液:除培养基、血清、谷氨酰胺外,其他几种液体也属必须,不可省略:

(1)双抗:200倍,(1ml/支)其终浓度为青霉素100U/ml;链霉素100ug/ml,-24 oC保存。  
(2)L-谷氨酰胺:100倍,(1ml/支), 终浓度2mM,-24 oC保存。  
(3)丙酮酸钠:配制浓度50mM,4ml/支,终浓度为1mM/ml, -24 oC保存。  
(4)Hepes液:配制浓度1M(5ml/支),一支Hepes加入到200ml  
完全培养基中,终浓度为25mM/ml,常温保存。 

——液体培养基中谷氨酰胺的作用,及使用方法。

几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20 ?C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 度 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。


——培养用液pH对细胞生长的影响

由于,大多数细胞适宜pH为7.2~7.4,偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。 
但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些,偏酸环境中更利于细胞生长。因此,我们在配制培养用液时,可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的PH还会向上浮动0.2左右。

——液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?

要冷藏!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的PH值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。

——液体培养基保存:

(1) 液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前需放入37℃预热再用。

(2) 未加血清液体培养基存放期为12个月,加入血清的液体培养及存放期为6个月。

(3) 液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。

——液体培养基偶然被冻,可否继续使用? 

如果细胞培养基偶然被冻,您应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生,培养基可以正常使用,如果出现沉淀,只能丢弃这些培养基。

——培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗? 

大部分添加物和试剂最多可以冻融3次,如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,将会影响它的性能。

(上海钰森生物)

本主题由 usenbio 于2017-10-13 重新编辑
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