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【液相色谱】 【原创】

液相色谱柱的使用、安装和保存

太原衡天力 在线
太原衡天力
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概述

色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。

色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成,没有色谱柱就不能进行分离、定性与定量了,色谱柱是根据柱子里的填充物不同来区别的,填充物又是根据需要分离的物质的极性来选择的。

一、液相色谱柱的使用方法

1、色谱柱使用前注意事项

色谱柱的储存液无特殊说明,均为评价报告所示的流动相。在使用前,一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出,堵塞色谱柱。

2、流动相

流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。以常规硅胶为基质的键合相填料通常的pH值适用范围是2.0~8.0,BDSC18适合于碱性化合物,pH值适用范围为2.0~10.0。当必须要在pH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。

3、样品

样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;

若样品不便处理,要使用保护柱,在用正相色谱法分析样品时,所有的溶剂和样品应严格脱水。

二、液相色谱柱的安装

液相柱卡套柱的安装(不加预柱)

1.将卡套架套入柱芯

2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使柱芯高于夹套

3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片

4.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧

5.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

6.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手

注意:

使用卡套柱时,两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗,任何时候都不能将卡套取下来,否则会造成填料的流失。

卡套柱的安装(加预柱):

1.将卡套架套入柱芯;

2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使夹套高于柱芯;

3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片;

4.将“子弹头”预柱放入卡套片内;

5.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧;

6.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

7.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片(同时可以修补色谱柱)

注意:

在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前,应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗,而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈,以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。

三、色谱柱的保存

1、反相色谱柱每天实验后的保养

使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。

2、长期保存色谱柱

如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上,储存的温度最好是室温。

(文章来源衡天力仪器网)

本主题由 西北飞哥 于2016-11-18 重新编辑
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